Частота и характеристика мутаций у человека

И доктор медицинских наук, профессор Ламберт Б Lambert Официальные оппоненты: частота и характеристика мутаций у человека биологических наук, профессор Шевченко Ведущая организация: Институт Биофизики Клетки РАН, г. Институтская, 3 ИТЭБ РАН. С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Института Теоретической и Экспериментальной Биофизики РАН. Автореферат разослан Ученый секретарь диссертационного совета Д 200. Многочисленные исследования показывают, что под действием различных эндогенных и огенных факторов в ДНК и других макромолекулах клетки возникают повреждения, шекулярные защитные системы клетки и репарации ДНК не достаточно обеспечивают юстность генетической информации Beckman and Ames. Малые дозы физических иических агентов, различные эндогенные факторы способны вызывать мутационные и щирогенные нарушения в геноме клеток. Исследования, направленные на выяснение ханизмов генетической стабильности, изучение последствий действия физических и «ических факторов на живые организмы и создание средств, методов биомониторинга 1яются важнейшими задачами экологической биофизики. Большую опасность для генофонда всего живого и в том числе человека представляют тианионные и химические мутагены, вводимые вереду обитания Фешбах, Фредли. Экоцид в 'CP, 1992. Формирование тационных изменений в геноме в результате повреждения ДНК, ошибок репарации и пликации и существенное превышение их частоты над фоновым спонтанным уровнем может ужить биомаркером для оценки поврежденности opi анизма генотоксинами, эффективности нкционирования системы репарации, риска развития канцерогенеза, старения и других генеративных процессов Vos1995. Одним из таких наиболее хорошо изученных именимых к человеку биомаркеров является мутация по гену гипоксантин-гуанин-юфорибозил трансферазы ЕС 2. Люди, страдающие ндромом Леч-Найхана, имеют дефект по этому гену, и hprt -мутации для клеток 1екопнтающих не детальны Rossiter et al. В ряде лабораторий ведутся исследования по тагенезу с использованием данного маркера, и особенно на лимфоцитах человека при йствии различных физических и химических агентов. Значительный интерес представляют следования с использованием маркера hprt по изучению эндогенных и экзогенных факторов, щулирующих мутагенез. Как известно, частота спонтанных hprt-мутаций в клетках человека еличивается с возрастом Albertini et al. Это увеличение коррелирует с накоплением онтанных повреждений в ДНК Mullaart eta!. Вместе с тем не статочно ясно, зависит ли от возраста организма уровень индуцируемых внешними агентами нных мутаций в клетках и, происходит ли снижение эффективности систем защиты клетки с зрастом, недостаточно изучены на молекулярном уровне механизмы закрепления мутационных изменений в ДНК. Свои исследования мы попытались направить на поиски ответов, на эти вопросы. Проведение таких исследований важно для понимания не только механизмов мутагенеза, канцерогенеза частота и характеристика мутаций у человека развития, различных возраст - зависимых патолоп но и для совершенствования методов биомониторинга ииодозиметрии факторов загрязнег среды. Цель н основные задачи исследования. Основной целыо настоящей работы является изучение частоты спонтанных индуцирован! В соответствии с этим были поставлены следующие задачи: - Определить частоту hprt мутаций в лимфоцитах селезёнки мышей разного возраста, необлученмых и облученных гамма -радиацией. Научная новизна и практическое значение работы. Проведенные исследования позволили впервые показать существенное увеличение часто! Показано, что скорость пролиферации Т-лимфоцитов с мутациями по гену hprt при культивировании in vitro ниже, i сравнению с таковой у нормальных клеток. Частота и характеристика мутаций у человека Показано, что введением в диету мышей дополнительных антиоксидантов удается снизить образование радиационно-индуцированных генных мутаци по локусу hprt в лимфоцитах старых и молодых животных. Полученные в работе данные указывают на увеличение чувствительности клеток организма млекопитающих с их возраст мутагенному действию факторов внешней среды. Результаты анализа индуцируемых hprt -мутаций в лимфоцитах селезенки мышей in vivo и снижение их частоты при увеличении антиоксидантов в диете животных указывает на возможность использования этого метода к ест-системы для скрининга ант мутагенов, антиканцерогенов, пригодных для профилактики енетических и канцерогенных последствий действия радиации других факторов среды. С использованием генетического маркера hprt-мутаций в лимфрцитах мышей разного возраста становлено, что со старением организма увеличивается частота генных мутаций, формируемых ie только спонтанно, но и при действии гамма -радиации, что свидетельствует частота и характеристика мутаций у человека возможности нижения эффективности молекулярных антимутагенных систем клетки с возрастом организма. Установлено, что длительное дополнительное введение природных антиоксидантов в диету лышам оказывает резко выраженный антимутагенный эффект, выявляемый по снижению lacTOTbi hprt мутаций в лимфоцитах гамма -облученных мышей разного возраста. Количественное :оотношение hprt мутаций, возникающих спонтанно и под действием окиси стирола сравнимо с »отношением этих же мутаций, индуцируемых редко ионизирующей радиацией в лимфоцитах lejioHCKa. Материалы диссертации докладывались на семинарах лаборатории радиационной молекулярной биологии ИТЭБ РАН, на семинарах отдела питания и токсикологии Каролинского Института Шведской АН, на 2-Радиобиологическом Сьезде Киев, 1993на 10-Международном Конгрессе г,о Радиационным Исследованиям ICRR Вюрцбург, 1995на практических курсах ЕМВО по сиквенированию DNA Хейдельберг, 1996на международной конференции по мутагенезу Генуя, 1997на международной конференции ASINA ТО 1997. По материалам диссертации опубликованы 7 статей и ряд тезисов. Объем и структура работы. Диссертационная работа включает в себя введение, обзор литературы, описание материалов и методов, изложение результатов их обсуждение, а также заключение, выводы и список цитируемой литературы, содержащий 181ссылки. Работа изложена на 102стр. Животных подвергали облучению различными дозами у-радиации исследовали образование мутаций по hprt-локусу с помои методов авторадиографии или клонирования мутантных клеток, соблюдая условий описанн pa6oTax Gocke et al. При анализ» авторадиограм число мутантных 6-тиогуанин-6ТГ устойчивых клеток рассчитывали с учет разведений и эффективности их стимуляции к росту. Образование hprt мутации в лимфоцит человека определяли методом клонирования как описано в работах Albertini et al. Частоту мутаций определяли как отношение эффективности клонирования в присутствии 6-ТГ к эффективно! Для определения молекулярной природы Myrai по hprt-локусу мутантные клоны собирали через 15-16 дней после начала культивирования в луночных планшетах. Лимфоциты промывали, замораживали в количестве 6x103 и ЗОх 103 д получения кДНК. По мере необходимости, клетки размораживали для выделения мРНК. С помощью частота и характеристика мутаций у человека транскриптазы М-М1Л0 на матрице этой мРНК синтезировали кДНК. Далее фрагменты кДНК подвергали амплификации с помощью полимеразной цепной реакщ ПЦР. В ПЦР брали частота и характеристика мутаций у человека мкл продукта кДНК. Taq ДНК-полимеразы на реакциюа также ПЦР-буфер и специфичные праймеры. Поскольку начальное количество hprt мРНК было незначительно, мы проводили вторую ПЦР реакцию, используя 1 -3 мкл продукта первой реакции и частота и характеристика мутаций у человека пару специфичес праймеров. После этого, 5 мкл продукта второй ПЦР наносили на полиакриломидный гель 3,75% для оценки качества и колическва конечного продукта ПЦР. Эффективность бы; обычно70-80%, это значит, что для 70-80% мутантных клонов удавалось получить ПЦР прод пригодный для сиквенирования. Мы использовали стандартный метод для сиквенирования с помощью набора PRISM Sequenase и автоматического сиквенатора Applied Biosistems, Koste City. Если в результате сиквенирования кДНК, выяснялось, что какой-либо из 9 экзоно отсутствует или имеет делецию, ю амплифицировали необходимый экзон непосредственно у геномной ДНК, с использованием специфичных для данного экзона праймеров. Полученные результаты молекулярного анализа мутаций hprt сравнивали с данными представленными в б данных hprt-database, MutaBase. Release 6содержащей результаты исследований hprt мутаций, опубликованных различными авторами за последние 2-Згода. Результаты экспериментов обрабатывались статистически согласно Beyer, 1966 или с использованием программы Sigma Stat 2. Результаты исследований их обсуждение. Частота и характеристика мутаций у человека определения количества мутантных по гену ЬрП клеток, в общей юпуляции лимфоцитов, используются два метода: авторадиографии и клонирования. В основе тих методов лежит способность мутантных клеток пролиферировать в присутствии 6-тиогу-;иина аналога пуринов, токсичного для нормальных клеток. Метод клонирования-основан на ,'пособности мутантных клеток пролиферировать и образовывать клон в селективной среде. Оба летода, хотя имеют свои «недостатки и частота и характеристика мутаций у человека, эффективно используются во многих иабораториях. На клетках человека было показано, что при одновременном использо-вании цвух методов для оценки количества Ирй мутаций можно получить различные величины. Наши исследования по оценке частоты ЬрЛ мутаций в лимфоцитах из селезенки мышей, с использованием обоих методов также дают результаты, различающиеся более чем в два раза. При чем, это различие регистрируется независимо от возраста животных, и во всех случаях величина частоты мутаций, определяемых методом авторадиографии в 2,0-2,4 раза выше таковой, получаемой методом клонирования клеток. Причина разницы величин частоты генных мутации, определяемых двумя методами в клетках человека и грызунов пока не понятно. Однако можно полагать, скорее всего, не все мутантные клетки способны образовывать клон или размер клона настолько мал. Поэтому в основных экспериментах с мышами мы использовали более быстрый метод авторадиографии, а с лимфоцитами человека метод получения мутантных клонов, поскольку с клетками человека была еще связана работа по изучению природы ИрП мутаций на молекулярном уровне. Результаты исследований показали, что уровень спонтанных ИрП мутаций в лимфоцитах селезенки мышей увеличивается с их возрастом. Увеличение спонтанных мутаций с частота и характеристика мутаций у человека у мышей составляет около 3% в месяц, относительно уровня мутации, регистрируемых у 2-2,5 месячных животных. Для сравнения отметим, что увеличение спонтанных ЬрЛ мутаций в лимфоцитах периферической крови человека составляет в среднем около 2% в год. Исходя из этих данных, можно полагать, что различия в скорости накопления спонтанных мутаций с возрастом у мышей и у человека, возможно, обусловлены разными скоростями метаболических процессов и, соответственно повышенной скоростью индукции «метаболических» повреждений ДНК в клетках мышей, сравнению с таковой у человека. Как было отмечено, метод клонирования лимфоцитов человека, несущих мутацию по hprt используется как для генетического мониторинга действия генотоксикантов среды, так для изучения и скрининга мутагенов in vitro. Литературые данные показывает, что регистри руемая разными авторами чатота hprt мутаций в лимфоцитах человека, возникающие под действием одинаковой дозы одного и того же агента в условиях in vitro, существенно различаеся. Анализ этих данных указывают, что различие явно обусловлено разным времен! В экспериментах с лимфоцитами человека мы получили данные, подтверждаю это предположение. Исследуя влияние частота и характеристика мутаций у человека на организм рабочих, связанных с его производством использованием мы обнаружили, что частота мутаций по hprt-локусу у них составляет 21,9 ±14,9 х10"6, что гораздо выше частоты мутации в контрольной группе: 7,6±5, хЮ"6. Полученные данные свидетельствуют, что стирол является мутагеном и способен in vi' вызывать образование hprt мутаций. Повышенный уровень стирола в крови рабочих Bastlov al. Но оказалось, что через 8 дней культивирования частота мута! Это свидетельствует о том, что число "новых" мутантных клеток, не частота и характеристика мутаций у человека фенотипически. Из данных этого эксперимента, можно предполагать, что мутантные лимфоциты проявляют более низкую пролиферативную активность, чем нормальные клетки, последующем эксперименте мы использовали лимфоциты, полученные из крови здоровых доноро Частоту мутаций определяли непосредственно после выделения клеток и через несколько дне их культивирования в неселективной среде. Результаты эксперимента представлены на Рис. Результаты экспе-риментов показывают, что мутантные по hprt гену клетки имеют более низкую пролифератив-ную активность, следовательно, это необходимо учитывать в экспериментах in vitro. Три использовании фазы экспрессии в экспериментах in vitro необходимо вводить юправочный коэффициент для полученной величины частоты мутаций равный 2 или более. Частота hprt мутаций в Т-лимфоцитах человека, определенная до и после 8 дней ультивирования. Номер образца Частота мутаций Частота мутаций xl О"6 х10"6 Эксперимент 1 Е2 15,3 8,2 ЕЗ 23,6 8,6 Е4 частота и характеристика мутаций у человека 26,2 Е5 13,9 10,7 Е6 7,6 2,6 Е7 18,8 5,5 Е8 9,6 4,3 Е9 6,5 0,3 CI3 11,2 8,8 С14 38,2 11,4 С15 6,2 4,5 редняя величина 18,7+153 8,3+6,9 ксперимент частота и характеристика мутаций у человека ЕЮ 31,2 2,7 Ell 41,6 10,1 Е12 18,5 5,1 CI6 15,5 3,3 CI7 12,6 16,0 CI8 16,8 1,8 CI9 5,6 0,8 Частота и характеристика мутаций у человека 16,0 3,7 С21 17,2 6,7 С22 9. Poci числа клеток в процессе культивирования. Исследование уровня спонтанных и гамма индуцированных hprt мутаций в лимфоцитах мышей разного возраста. Тест-система hprt мутации широко используется для изучения спонтанного индуцированного мутагенеза в клетках млекопитающих in vitro. Вместе с тем, в ряде случг возникает необходимость использования этого метода в исследованиях по изучению генж мутации на уровне целого организма в условиях in vivo. Это, прежде всего, связано с тем,L возникновение соматических мутации рассматривается как первая ступень в индукции канцерогенеза. Необходимость изучения мутагенеза на организменном уровне частота и характеристика мутаций у человека ri оценке риска действия различных физических и химических агентов, при исследовании модулирующих факторов, а также при различных физиологических состояниях и в процес старения организма. Достаточно удобным объектом для таких исследований являются линейные мыши, из селезенки которых можно получить необходимое количество ликфоц На рисунке 2 представлены результаты анализа частоты hprt мутации в лимфоцитах селезёнки мышей 8-104-недельного возраста, облученных гамма-радиацией. Из представленных данных можно видеть, что частота мутаций в лимфоцитах селезенки облученных мышей возрастает как производное дозы гамма- облучения. В пределах доз 0. Вместе с тем частота мутаций в лимфоцитах! Образование hprt мутаций в лимфоцитах мышей разного возраста в зависимости от их у -облучения. Так, фоновый уровень мутаций в лимфоцитах старых мышей превышает фоновый уровень мутаций у молодых мышей только на 88%, а частота мутаций в клетках гамма-облученных 104-недельных мышей превышает эту величину у 8-недельных мышей на 127-300% в зависимости от дозы облучения. Эта тенденция повышения с возрастом радиационно-индуцированных мутации подтверждается в экспериментах с использованием групп мышей 8, 14, 42, 78, 104, 110 недельных возрастов. Из результатов этих экспериментов можно предположить, что в процессе старения организма возрастает чувствительность его клеток к действию радиации по критерию образования генных мутаций по гену Ирп. Эти данные позволяют также предполагать, что клеточные системы генозащиты в лимфоцитах стареющих млекопитающих функционируют менее надежно, чем в лимфоцитах молодых. Модуляция частоты мутаций диетическими аптиоксидантамй. В клеточных макромолекулах постоянно возникают повреждения под действием активных форм кислорода и других эндогенных и экзогенных факторов. Повреждения в генетических структурах возникают и накапливаются, хотя живые организмы эволюционно наделены системами первичной защиты и репарации ДНК. Количество спонтанных повреждений в ДНК. К клеточным системам первичной защиты генома относятся ферментативные и низкомолекулярные антиоксиданты. Многие низкомолекулярные антиоксиданты-генопротекторы человек и млекопитающие получают с пищей. Ряд антиоксидантов-витаминов являются эффективными антимутагенами и средствами хемопривентации канцерогенеза. Поэтому, в настоящем исследований мы попытались, использовать тест-систему ИрП мутации на мышах, для выяснения возможности снижения частоты генных мутаций у млекопитающих дополнительными введениями диетических антиоксидантов. В качестве такой диетической добавки была использована антиоксидантная смесь, содержащая витамины С и ГС, бета-каротин, рутин, а так же селенит натрия и глюконат цинка АнтиОкс. Все компоненты данной смеси являются прямыми или косвенными «перехватчиками» свободных радикалов, или же входят в активные центры ферментов, регулирующих системы защиты частота и характеристика мутаций у человека репарации. В предварительных экпериментах было установлено, что только при длнтельном 30-45 дней введении в диету мышей этой дополнительной добавки, в клетках тканей значительно повышались антирадикальная и антимутагенная активности. Животные 14, 42, 78, 110 недельных возрастов, получающие антиоксидантные диетические добавки или получающие плацебо, подвергались облучению в дозах 2 и 5 Гр. Как видно из представленных данных Рис. В работа Ушаковой и др. Можно полагать, что используемая нами диетическая добавка проявляет свое антимутагенное действие ие только как прямой "прехватчик" радикалов, но и через активацию экспрессии защитных генов. Можно частота и характеристика мутаций у человека отметить, что в этих экспериментах наибольший генозащитны эффект проявляется у молодых животных 14-недельного возраста. Так, индекс снижения частоты мутации ИСЧМ у молодых мышей, получавших АнтиОкс при облучении в дозе 2 Гр составляет 5,4, тогда как это значение у 110-недельных равна 4,4. А при облучении в дозе 5 Гр ИСЧМ для молодых животных соответствует 5,3 у стареющий животных 3,7. Частота Возраст мышей, недели Это указывает, что антимутагенное дейсвие АнтиОкс более эффективно у молодых мышей, че! Таким образом, результаты экспериментов показывают, что применение антиоксидантной смеси в качестве диетической добавки вызывает значительное снижение частоты мутаций в лимфоцитах мышей разного возраста подвергшихся облучению, а также снижает частоту спонтанных мутаций у стареющих мышей. Полученные данные по анализу Ьр1 мутации показывают, частота и характеристика мутаций у человека существующие клеточные системы генозащиты у млекопитающих недостаточно эффективны и нуждаются в постоянном усилении и особенно при действии экстремальных факторов и в процессе старения организма. Сравнительны» молекулярный анализ спонтанных индуцированных мутаций в составе гена HPRT. Полный сиквенс ДНК hprt- локуса был выполнен Edwards с частота и характеристика мутаций у человека в 1990 году Edwards et al. Продукт hprt гена представляет собой белок, состоящий из 217 аминокислот и образующий тетрамерный комплекс для функциональной активности. Кристаллическая структура hprt белка была определена в 1994году Eads et al. Считается, что любая замена в аминокислотной последовательности белка приводит к потере его активности и. В наших экспериментах мы исследовали спектр спонтанных мутаций, возникающих in vivo. Для этого мы использовали лимфоциты, полученные из периферической крови рабочих работающих в гараже, средняя величина частоты мутаций по hprt локусу равна 9,3±5,1 xl О"6что не превышает средне статистические значения. Было определено 117 мутаций на уровне кДНК, 74% из которых были замены пар оснований, 10% -сдвиг рамки считывания, частота и характеристика мутаций у человека - делений 3-52 пар оснований. Дополнительно, были определены две тандемные замены пар оснований и одна комплексная мутация. Простые замены пар оснований были обнаружены в 56 20% из 281 известных мутабильных мест в кДНК. На рисунке показаны номера позиций, где мутации встречались от 3 до 6 раз. Можно видеть, что мутации распределились двумя кластерами: много мутаций в первой трет! Такое распределение мутаций предполагает наличие "горячих мест" для их возникновения. Мутации редко встречались в экзонах 1 и 4, и образовывали кластеры экзонах 3 и 9. Наиболее частыми в кДНК были мутации в позициях 197 и 146. В этих позицт были 6 и 5 независимых мутаций соответственно, что значительно отличается от случайного распределения РАТ наиболее распространённая мутация среди замен пар оснований. Более чем частота и характеристика мутаций у человека не больших делеций 3-52 п. Большее число мутаций по ГЦ паре возможно связано с деаминированием 5-метилцитозина Е ЦГ участках. Результаты анализа замен пар оснований в кДНК представлены в Таблице 2 в сравнении сданными, имеющими в литературе и банка «MutaBase». Полученные нами данн хорошо согласуются с данными банка «МшаВайС» и результатами других исследований, и взятые частота и характеристика мутаций у человека два спектра представляют реальную картину спонтанных мутаций по гену ЬрП для здоровых некурящих людей. В последующих экспериментах в качестве повреждающего агента был выбран оксид стирола. Стирол является мономером для получения полистирола и других продуктов химической промышленности, а стирол-7,8-оксид СО его непосредственный метаболит т vivo был классифицирован как «возможный и вероятный» канцероген для человека IARC, 1994. Ранее было показано увеличение уровня 6-О-гуаниновых частота и характеристика мутаций у человека и частоты hprt мутаций в Т-лимфоцитах человека, обработанных оксидом стирола in vitro Bastlova et al. Мы изучали на молекулярном уровне мутации, индуцированные СО в Т-лимфоцитах человека in vitro, обоснованно предполагая, что характерный спектр мутаций, вызванных СО, частота и характеристика мутаций у человека использовать в качестве биомаркера частота и характеристика мутаций у человека для исследований in vivo. При воздействии СО, а частота и характеристика мутаций у человека 0. Было собрано около 200 клонов клеток после обработки СО, и около 140 клонов контрольных клеток. В ходе частота и характеристика мутаций у человека было сиквенироваио на уровне кДНК 55 клонов после воздействия СО частота и характеристика мутаций у человека 44 контрольных клопов, кроме этого геномная ДНК была исследована для 49 СО-обработанных клона и для 7 контрольных. На основании полученных результатов можно сделать вывод, что спектр мутаций, индуцированных оксидом стирола, отличается от спектра мутаций контрольных клонов. Результаты молекулярного анализа мутаций по hprt локусу после воздействия оксида стирола и контрольных клонов представлены в таблице 3. Одним из специфичных аддуктов образующихся при воздействии оксида стирола является С гуанин Vodicka et al. Это указывает, что ОС иидуцир в ДНК и другие повреждения, кроме Ой-гуанина, или, возможно, такие повреждения хорошо репарируются или же аддукты типа 06-гуанин, вызванные оксидом стирола, не являются достаточно стабильными соединениями. Необходимо также заметить, что существуют некоторые отличия в распределении мутаций между контрольными клонами в наших экспериментах и данными из банка «MutaBase». Возможно, это связано с тем, что литературь данные, представленные в банке «MutaBase», были взяты из многих независимых источнико! Сравнен результатов анализа спектра спонтанных мутаций в гене hprt. Это указывает на влияние условий инкубации клеток на формирование спонтанных мутаций в гене hprt. Показано, что частота спонтанных hprt мутаций в лимфоцитах селезенки старых 102-114 недельных мышей на 70-80% выше по сравнению с таковой у молодых 8-14 недельных. Спонтанные мутаций в гене hprt клеток мышей увеличиваются с их возрастом в среднем с скоростью 0,16х10'6 заодин месяц. Установлено, что у людей занятых в производстве стирола повышена частота hprt мутацш лимфоцитах периферической крови. Показана линейная зависимость образования hprt мутации in vivo в лимфоцитах селезенки мышей от дозы их частота и характеристика мутаций у человека - облучения. Частота индуцированных hprt мутаций частота и характеристика мутаций у человека клетках молоды мышей возрастает в 1,9-10,7 раза, а у старых в 2. Показано, что введение в диегу мышей разного возраста антиоксидантной смеси, содержащей витамины Е, бета-каротин, рутин, селенит натрия и глкжонат цинка, оказывает антимутагенный эффект, выражающийся в 4-5 кратном снижении hprt мутации, индуцируемых у - радиацией в лимфоцитах этих мышей. Основной вклад в спонтанные мутации гена hprt вносят тран~иции и траисверсии -76%. Показано, что спектр hprl мутаций, возникающих спонтанно, частота и характеристика мутаций у человека инкубации лимфоцитов человека in vitro в течение 12-14 суток, существенно отличается от спектра этих же мутаций, спонтанно возникающих in viro, а также и от спектра мутаций, индуцируемых оксидом стирола in vitro. Список статей, опубликованных ito тсие диссертации: 1. Увеличение с позрастом частоты спонтанных индуцированных y-радиацией hprt-мугаций в лимфоцитах селезенки мышей. Доклады Российской Академии Hay к, {1 994. Dietary supplements of antioxidants reduce hprt mutant frequency in splenocjtes of aging mice. Mutation Research, 199533S, 7786. Molecular analysis of styrene oxide induced hprt mutation in human T-lymphocytes. Reduced proliferation rate of hypoxanthine-phosphoribosyl transferase mutant human T-lymphocytes in vitro. Environmental and Molecular Mutagenesis, 199628, 13-18. Hou, Sequence analysis of deletion at the hprt locus of human T-lymphocytes: association of a palindromic structure with a breakpoint cluster in exon 2. Сирота, Диетические антиоксиданты увеличивают продолжительность жизни мышей, снижают частоту мутаций и увеличивают экспрессию защитных генов. Успехи геронтологии, 19971, 80-84. Lambert, Spectrum of point n jtations in the coding regioi. Carcinogenesis, 199819. Научное издание Автореферат Подлуцкого Налоговая льгота - общероссийский классификатор продукции СЖ-005-93, том 2; 953000 - книги и брошюры. Отпечатано частота и характеристика мутаций у человека оригинала-макета в Отделе научно-технической информация Путинского научного центра РАН.

См. также